Allt du behöver veta om HPLC -provberedning

Exempelberedning är ett kritiskt steg i HPLC -analys av flera skäl.

Minimera störningar:Prover innehåller ofta föroreningar och matriskomponenter som kan störa detekteringen av målanalyser. Effektiva provberedningstekniker kan hjälpa till att ta bort dessa oönskade ämnen och förbättra analytisk noggrannhet.

Förbättra analytåterhämtningen:Korrekt beredning förbättrar analytåtervinning och säkerställer att resultaten återspeglar den faktiska koncentrationen av det ursprungliga provet. Detta är särskilt viktigt för spåranalys där analytter finns i låga koncentrationer.

Förbättrad toppform:Korrekt beredda prover hjälper till att bilda symmetriska och väl definierade toppar i kromatogrammet. Detta är viktigt för exakt kvantifiering. Felaktig provberedning kan resultera i toppskakning och breddning, vilket komplicerar tolkning av datatolkningar.

Skydda ditt HPLC -system:Föroreningar i ditt prov kan skada kolumner och andra komponenter i ditt HPLC -system, vilket kan leda till ökade underhållskostnader och driftstopp. Korrekt provberedning minskar risken för systemtropp och slitage.

Det första steget i provberedningen är att samla in ditt prov korrekt. Detta inkluderar:

Använd rena behållare:Använd alltid rena, inerta behållare för att undvika föroreningar. Glas- eller högkvalitativa plastbehållare rekommenderas.

Undvik förorening:Använd handskar och rena verktyg för att förhindra förorening från talg och andra källor.

Korrekt märkning:Märk tydligt prover för att undvika blandningar och säkerställa spårbarhet.

Provhomogenisering säkerställer homogenitet, vilket är viktigt för reproducerbara resultat. Homogeniseringstekniker inkluderar:

Mekanisk homogenisering: Blandning av fasta eller halvfasta prover med användning av en omrörare eller homogenisator.

Ultraljudshomogenisering:Applicering av ultraljud för att sprida partiklar inom ett flytande prov.

Beroende på den förväntade koncentrationen av analytter kan prover behöva spädas eller koncentreras. Detta kan uppnås genom:

Utspädning:Späd provet till önskad koncentration med samma lösningsmedel som den mobila fasen.

Koncentration:Analyser kan koncentreras med hjälp av tekniker såsom indunstning eller extraktion av fast fas (SPE).

Filtrering är viktigt för att ta bort partiklar som kan täppa till HPLC -kolumner. Vanliga filtreringsmetoder inkluderar ：

Membranfiltrering:Använda0,2 um eller 0,45 um filterför att ta bort partiklar. Vanligtvis används polyetersulfone (PES) eller nylonfilter.

Prefiltration:För prover med högt partikelinnehåll kan föregångning genom ett större porstorleksfilter förhindra igensättning.


50 Vanliga frågor om sprutfilter, se till att kolla in denna informativa artikel: Ämnet "sprutfilter" 50 ofta ställda frågor

Överväg att stabilisera ditt prov för att förhindra nedbrytning av analyt.

pH -justering:Justering av pH kan hjälpa till att stabilisera vissa analyser. Till exempel kan sura föreningar kräva försurning för att förhindra nedbrytning.

Tillsatser:Att lägga till stabilisatorer eller konserveringsmedel kan hjälpa till att upprätthålla provintegritet under lagring och analys.

Det är viktigt att välja rätt lösningsmedel för att lösa upp ditt prov och säkerställa kompatibilitet med ditt HPLC -system. Tänk på följande:

Lösningsmedelpolaritet:För att uppnå fullständig upplösning måste lösningsmedlet matcha analytens polaritet.

Mobilfaskompatibilitet: Använd ett lösningsmedel som är kompatibelt med den mobila fasen för att minimera potentiella störningar.

7. Förberedelse av standarder

Beredning av kalibreringsstandarder är avgörande för att kvantifiera en analyt i ett prov. Detta inkluderar:

Beredning av kalibreringskurva:Förbered en serie kända koncentrationer av analyt för att upprätta en kalibreringskurva för kvantifiering.

Använd samma lösningsmedel:För att upprätthålla konsistens, förbered alltid dina standarder med samma lösningsmedel och förhållanden som dina prover.

Följ standardförfaranden (SOP):Upprätta och hålla fast vid SOP: er för provberedning för att säkerställa konsistens och reproducerbarhet.

Använd reagens och lösningsmedel av hög kvalitet:Använd alltid lösningsmedel för HPLC-klass och reagens med hög renhet för att minimera föroreningar.

Håll din arbetsyta ren:Håll ditt provberedningsområde rent och organiserat för att minska risken för förorening.

Dokumentera allt:Håll detaljerade register över dina provförberedelser, inklusive eventuella avvikelser från standardprotokoll.

Validera metoder:Validera provförberedningsmetoder regelbundet för att säkerställa att de ger tillförlitliga och reproducerbara resultat.

Dålig toppform:Om toppar är breda eller skräddarsydda kan detta indikera ofullständig upplösning eller närvaro av partiklar. Se till att ditt prov är grundligt blandat och filtrerat.

Ghost Peaks:Ghost-toppar kan orsakas av föroreningar i lösningsmedlet eller provet, använda lösningsmedel med hög renhet och se till att allt glas och utrustning är rena.

Låg känslighet:Om känsligheten är låg, överväg att optimera din extraktionsmetod eller öka koncentrationen av din analyt.

Kolumntäppning:Ofta kan tilltäppning indikera att ditt prov innehåller för många partiklar eller inte filtreras tillräckligt. Utvärdera din filtreringsprocess om och överväga förfiltrering.

Inkonsekventa resultat:Variation i resultat kan komma från inkonsekvent provberedning. Standardisera alla procedurer och se till att personal som är involverad i provberedning är korrekt utbildade.

När analytiska krav ökar använder laboratorier mer avancerade provberedningstekniker för att förbättra effektiviteten och noggrannheten:

SPE är en allmänt använt teknik som möjliggör selektiv extraktion av analytter från komplexa matriser. Det handlar om att passera ett flytande prov genom ett fast adsorbentmaterial som behåller målanalyten samtidigt som föroreningar kan passera.

LLE är en teknik som separerar analytter baserat på deras löslighet i två oblandbara vätskor. Denna metod är effektiv för att separera föreningar med olika polariteter och används ofta i miljö- och farmaceutisk analys.

Quechers är en populär metod för att förbereda mat- och miljöprover som kombinerar extraktions- och saneringsstegen till en process, vilket gör det effektivt och kostnadseffektivt.

Genomströmning och reproducerbarhet kan förbättras avsevärt genom automatiserade provberedningssystem, som kan utföra uppgifter såsom utspädning, filtrering och SPE med minimal mänsklig intervention, vilket minskar risken för fel.


Vill du veta mer om HPLC -provberedning, kontrollera den här artikeln: HPLC -provberedningslösningar för bästa resultat

HPLC -provberedning är ett kritiskt steg som kan påverka noggrannheten och tillförlitligheten för analytiska resultat. Genom att följa bästa metoder, använda lämpliga tekniker och hantera vanliga problem kan laboratorier optimera provberedningsprocessen genom att använda avancerade tekniker och tekniker när analytiska behov utvecklas. Automation kommer att förbättra effektiviteten och effektiviteten hos HPLC -analyser. Korrekt provberedning förbättrar inte bara resultaten, utan skyddar också HPLC-systemet, vilket säkerställer långsiktig tillförlitlighet och prestanda.