Mwongozo kamili wa Utaftaji wa Sampuli ya HPLC - Filtration, Uchimbaji, na Derivatization
Habari
Jamii
Uchunguzi

Mfano wa mfano wa HPLC-mwongozo wa hatua kwa hatua

Oktoba 21, 2025
Lebo:

Sampuli ya uchunguzi wa muhtasari

Uchunguzi wa mfano ni pamoja na shughuli zote kabla ya sindano. Licha ya kupima, kufuta, na kufutwa, pia inajumuisha hatua zifuatazo:

  • Kuchujwa
  • Uchimbaji
  • Derivatization (derivatization ya kabla ya safu)
  • Chromatografia ya kioevu (chromatografia ya safu ya chini ya shinikizo)

Utapeli unaweza kufanywa kwa mikono au automatiska. Je! Unafahamiana na upeanaji wa mfano?


Derivatization

Sampuli zingine bado haziwezi kuingizwa moja kwa moja baada ya kujifanya. Derivatization inahitajika kutengeneza misombo bila kunyonya kwa UV au fluorescence inayoweza kugunduliwa na UV au uchunguzi wa fluorescence.

  • Inaboresha usikivu
  • Huongeza kujitenga (mabadiliko ya ubora)

Maswala yanayowezekana ni pamoja na upotezaji wa sampuli, uchafu, athari ambazo hazijakamilika, au bidhaa nyingi, ambazo zinaweza kuathiri usahihi au kuanzisha makosa.

Mfano wa kuchujwa

Sampuli za LC lazima ziwe sawa na zisizo na chembe; Chembe zinaweza kuharibu sindano au kuzuia safu. Hatua ni pamoja na:

  • Shika sampuli kabla ya sindano na angalia chembe, turbidity, au emulsions
  • Ikiwa chembe zinazingatiwa, chuja sampuli kwa kutumia membrane ambayo inaweza kuhifadhi chembe ≥0.15μm

Maswala yanayowezekana: Mchanganyiko wa sampuli, mkusanyiko wa sehemu ya adsorption, na uvukizi wa kutengenezea husababisha makosa.

Njia za uchimbaji

Uchimbaji hutenganisha uchambuzi kutoka kwa vimumunyisho vya pamoja au huondoa vitu vya kuingilia (k.v. protini). Vimumunyisho vya kikaboni vinapaswa kuwa na sumu ya chini, tete, chini katika uchafu, na kufuta sampuli vizuri.

Vimumunyisho vya kawaida: diethyl ether, ethyl acetate, dichloromethane, chloroform, benzini, au mchanganyiko.

Baada ya uchimbaji, sampuli zinaweza kuingizwa moja kwa moja au kujilimbikizia ili kuongeza mkusanyiko wa uchambuzi na unyeti.

Mchanganyiko wa sampuli ya mumunyifu

  1. Vipengele vya asidi na chumvi: Futa uchafu na kutengenezea kikaboni, urekebishe kwa asidi, kisha toa au sindano; au kavu chini ya N₂ na kufuta katika kutengenezea sahihi kabla ya sindano.
  2. Vipengele vya msingi na chumvi: Futa uchafu na kutengenezea kikaboni, urekebishe kwa msingi, kisha toa au sindano; au kavu chini ya N₂ na kufuta katika kutengenezea sahihi kabla ya sindano.
  3. Vipengele vya Neutral: Ondoa uchafu na kutengenezea kikaboni, kisha kuchambua moja kwa moja na chromatografia ya awamu iliyobadilishwa.


Mchanganyiko wa sampuli ya mumunyifu

Dondoo na kutengenezea kikaboni au sindano moja kwa moja; au kavu chini ya N₂ na kufuta katika kutengenezea sahihi kabla ya sindano.


Vyanzo vya uchafuzi

Vyanzo vinavyowezekana vya uchafu katika uchambuzi:

Aina ya uchafu

Chanzo

Hatua za kuzuia

Mazingira

Gesi zenye hatari, vumbi, erosoli

Weka chumba cha chombo kilichotengwa, safi; Weka AC; kudhibiti unyevu <70%; Kuzuia unyevu, kutu, vibration

Vyombo

Kioo, kauri, quartz, labware ya plastiki

Chagua vyombo vinavyofaa kwa aina ya sampuli; Safi kabisa

Reagents

Reagents zisizo za chromatografia

Tumia kiwango cha chromatografia, usafi wa hali ya juu, au reagents za kiwango cha uchambuzi


Maandalizi ya suluhisho la kawaida

  • Andaa suluhisho la kiwango cha ndani kwanza; Tumia kundi moja kwa viwango na sampuli kupunguza makosa
  • Vitu lazima iwe ya kiwango cha chromatografia na thabiti
  • Hifadhi suluhisho za kawaida katika chupa za kahawia kwa joto la chini
  • Kwa vitamini, tumia flasks za hudhurungi za hudhurungi au ulinde kutoka kwa nuru


Shida za kawaida katika upeanaji wa sampuli na suluhisho

Tatizo

Sababu

Suluhisho

Peaks zisizohusiana katika chromatogram

Uchafuzi wa chujio

  1. Loweka kichungi katika kutengenezea sampuli na sindano ya mtihani

  2. Badilisha aina ya vichungi

  3. Tumia mbinu mbadala za kusafisha

Jibu la kilele cha chini (haswa sampuli za chini za mkusanyiko)

Adsorption kwenye uso wa chujio

  1. Badilisha aina ya vichungi

  2. Kusindika sampuli zote chini ya hali sawa

  3. Tumia mbinu mbadala za kusafisha

Kupona chini

Mchanganyiko usio kamili

  1. Ongeza wakati wa uchimbaji, tumia kutengenezea moto

  2. Rekebisha njia ya kusafisha

Peaks zilizopanuliwa, kufupishwa kwa safu ya maisha

Uingiliaji wa sampuli na uchafu

Boresha njia ya kusafisha

Usahihi duni

Kupona kamili

  1. Boresha au ubadilishe derivatization, kujitenga, uchimbaji, au hali zingine

  2. Tumia utunzaji wa kiotomatiki ili kuboresha usahihi

Uchunguzi