คู่มือที่ครอบคลุมเกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่าง HPLC – การกรอง การสกัด และการทำให้เป็นอนุพันธ์
กรณี
โทร: สิ่งแวดล้อมคำถามที่พบบ่อย
การกรอง
ปัญหา

การเตรียมตัวอย่าง HPLC – คำแนะนำทีละขั้นตอน

21 ต.ค. 2025
สาเหตุ

ภาพรวมการปรับสภาพตัวอย่าง

การปรับสภาพตัวอย่างรวมถึงการดำเนินการทั้งหมดก่อนการฉีด นอกจากการชั่งน้ำหนัก การละลาย และการเจือจางแล้ว ยังเกี่ยวข้องกับขั้นตอนต่อไปนี้ด้วย:

  • การสกัด
  • ตู้คอนเทนเนอร์
  • อนุพันธ์ (อนุพันธ์ก่อนคอลัมน์)
  • โครมาโตกราฟีของเหลว (โครมาโตกราฟีคอลัมน์ความดันต่ำ)

การบำบัดล่วงหน้าสามารถทำได้ด้วยตนเองหรืออัตโนมัติ คุณคุ้นเคยกับการปรับสภาพตัวอย่างหรือไม่


อนุพันธ์

ตัวอย่างบางส่วนยังคงไม่สามารถฉีดได้โดยตรงหลังจากการปรับสภาพล่วงหน้า จำเป็นต้องมีอนุพันธ์เพื่อสร้างสารประกอบที่ไม่มีการดูดซับรังสียูวีหรือการตรวจจับเรืองแสงโดยเครื่องตรวจจับรังสียูวีหรือเรืองแสง

  • ปรับปรุงความไว
  • ช่วยเพิ่มการแยก (การเปลี่ยนแปลงคุณภาพ)

ปัญหาที่เป็นไปได้ ได้แก่ การสูญเสียตัวอย่าง การปนเปื้อน ปฏิกิริยาที่ไม่สมบูรณ์ หรือผลพลอยได้หลายอย่าง ซึ่งอาจส่งผลต่อความแม่นยำหรือทำให้เกิดข้อผิดพลาด

การกรองตัวอย่าง

ตัวอย่าง LC ต้องสม่ำเสมอและปราศจากอนุภาค อนุภาคอาจทำให้หัวฉีดเสียหายหรืออุดตันคอลัมน์ได้ ขั้นตอนได้แก่:

  • เขย่าตัวอย่างก่อนฉีด และตรวจหาอนุภาค ความขุ่น หรืออิมัลชัน
  • หากสังเกตเห็นอนุภาค ให้กรองตัวอย่างโดยใช้เมมเบรนที่สามารถกักเก็บอนุภาคขนาด ≥0.15μm ได้

ปัญหาที่อาจเกิดขึ้น: การปนเปื้อนของตัวอย่าง ความเข้มข้นของส่วนประกอบการดูดซับลดลง และการระเหยของตัวทำละลายที่ทำให้เกิดข้อผิดพลาด

วิธีการสกัด

การสกัดจะแยกสารที่วิเคราะห์ออกจากตัวทำละลายร่วมหรือกำจัดสารที่รบกวน (เช่น โปรตีน) ตัวทำละลายอินทรีย์ควรมีความเป็นพิษต่ำ ระเหยง่าย สิ่งเจือปนต่ำ และละลายตัวอย่างได้ดี

ตัวทำละลายทั่วไป: ไดเอทิลอีเทอร์, เอทิลอะซิเตต, ไดคลอโรมีเทน, คลอโรฟอร์ม, เบนซีน หรือสารผสม

หลังจากการสกัด คุณสามารถฉีดตัวอย่างโดยตรงหรือทำให้เข้มข้นเพื่อเพิ่มความเข้มข้นและความไวของสารวิเคราะห์

การสกัดตัวอย่างที่ละลายน้ำได้

  1. ส่วนประกอบที่เป็นกรดและเกลือ: สกัดสิ่งเจือปนด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ ปรับให้เป็นกรด จากนั้นจึงสกัดหรือฉีด หรือแห้งภายใต้ N₂ และละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสมก่อนฉีด
  2. ส่วนประกอบพื้นฐานและเกลือ: สกัดสิ่งเจือปนด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ ปรับเป็นสารพื้นฐาน จากนั้นจึงสกัดหรือฉีด หรือแห้งภายใต้ N₂ และละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสมก่อนฉีด
  3. ส่วนประกอบที่เป็นกลาง: แยกสิ่งเจือปนด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ จากนั้นวิเคราะห์โดยตรงด้วยโครมาโทกราฟีแบบรีเวิร์สเฟส


การสกัดตัวอย่างที่ละลายได้ในไขมัน

สกัดด้วยตัวทำละลายอินทรีย์หรือฉีดโดยตรง หรือแห้งภายใต้ N₂ และละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสมก่อนฉีด


แหล่งที่มาของการปนเปื้อน

แหล่งที่มาของการปนเปื้อนที่เป็นไปได้ในการวิเคราะห์:

ประเภทการปนเปื้อน

ส่ง

มาตรการป้องกัน

รายการสินค้า

ก๊าซ ฝุ่น ละอองลอยที่เป็นอันตราย

เก็บห้องเครื่องดนตรีไว้แยกจากกัน สะอาด ติดตั้งเครื่องปรับอากาศ; ควบคุมความชื้น <70%; ป้องกันความชื้น การกัดกร่อน การสั่นสะเทือน

ลิงค์ด่วน

แก้ว เซรามิก ควอทซ์ อุปกรณ์ห้องปฏิบัติการพลาสติก

เลือกภาชนะที่เหมาะสมตามประเภทตัวอย่าง ทำความสะอาดอย่างทั่วถึง

โซลูชั่น

รีเอเจนต์ที่ไม่ใช่โครมาโทกราฟี

ใช้รีเอเจนต์เกรดโครมาโตกราฟี มีความบริสุทธิ์สูง หรือเกรดวิเคราะห์


การเตรียมสารละลายมาตรฐาน

  • เตรียมโซลูชันมาตรฐานภายในก่อน ใช้ชุดเดียวกันในมาตรฐานและตัวอย่างเพื่อลดข้อผิดพลาด
  • สารจะต้องมีเกรดโครมาโทกราฟีและมีความเสถียร
  • เก็บสารละลายมาตรฐานไว้ในขวดสีน้ำตาลที่อุณหภูมิต่ำ
  • สำหรับวิตามิน ให้ใช้ขวดปริมาตรสีน้ำตาลหรือป้องกันแสง


ปัญหาทั่วไปในการเตรียมตัวอย่างและวิธีแก้ปัญหา

สอบถามรายละเอียดเพิ่มเติม

ถัดไป:

*ข้อความ

พีคที่ไม่เกี่ยวข้องกันในโครมาโตกราฟี

กรองสิ่งปนเปื้อน

  1. แช่ตัวกรองในตัวทำละลายตัวอย่างและฉีดทดสอบ

  2. เปลี่ยนประเภทตัวกรอง

  3. ใช้เทคนิคการทำความสะอาดแบบอื่น

การตอบสนองสูงสุดต่ำ (โดยเฉพาะตัวอย่างที่มีความเข้มข้นต่ำ)

การดูดซับบนพื้นผิวตัวกรอง

  1. เปลี่ยนประเภทตัวกรอง

  2. ประมวลผลตัวอย่างทั้งหมดภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน

  3. ใช้เทคนิคการทำความสะอาดแบบอื่น

กลับไปที่รายการ

การสกัดที่ไม่สมบูรณ์

  1. เพิ่มเวลาในการสกัด ใช้ตัวทำละลายร้อน

  2. ปรับวิธีการทำความสะอาด

จุดสูงสุดที่กว้างขึ้น อายุการใช้งานของคอลัมน์สั้นลง

ตัวอย่างการรบกวนและการปนเปื้อน

ปรับปรุงวิธีการทำความสะอาด

ความแม่นยำไม่ดี

การกู้คืนที่ไม่สมบูรณ์

  1. ปรับให้เหมาะสมหรือแทนที่การแปลงอนุพันธ์ การแยก การสกัด หรือเงื่อนไขอื่นๆ

  2. ใช้การจัดการแบบอัตโนมัติเพื่อปรับปรุงความแม่นยำ

*อีเมล์