HPLC เชิงวิเคราะห์และการเตรียมความพร้อมคืออะไร?

โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่สำคัญที่ใช้ในห้องปฏิบัติการในสาขาที่มีความหลากหลายเช่นเวชภัณฑ์วิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อมและความปลอดภัยของอาหาร ภายในโลก HPLC มีสองประเภทหลัก: การวิเคราะห์ HPLC และ HPLC เตรียมการ ในขณะที่เทคนิคทั้งสองใช้หลักการที่คล้ายกันในการแยกสารประกอบพวกเขาจะใช้เพื่อวัตถุประสงค์ที่แตกต่างกันและมีพารามิเตอร์การทำงานที่แตกต่างกัน บล็อกนี้จะสำรวจความแตกต่างระหว่างการวิเคราะห์และการเตรียม HPLC รวมถึงวัตถุประสงค์ระดับการใช้งานอุปกรณ์และแอปพลิเคชัน

ต้องการทราบอินฟอร์เต็มรูปแบบเกี่ยวกับขวด HPLC โปรดตรวจสอบบทความนี้: สารานุกรมของขวด HPLC

ทำความเข้าใจกับการวิเคราะห์ HPLC

คำจำกัดความและวัตถุประสงค์

การวิเคราะห์ HPLC มุ่งเน้นไปที่การแยกและระบุสารประกอบในตัวอย่างเป็นหลัก เป้าหมายหลักคือการได้รับข้อมูลเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณเกี่ยวกับส่วนประกอบที่มีอยู่ในส่วนผสม การวิเคราะห์ HPLC มักใช้สำหรับ:

การวิเคราะห์เชิงคุณภาพ: การระบุส่วนประกอบของตัวอย่าง

การวิเคราะห์เชิงปริมาณ: การกำหนดความเข้มข้นของสารประกอบเฉพาะในตัวอย่าง

ระดับการทำงาน

การวิเคราะห์ HPLC ทำงานในระดับที่เล็กลงโดยทั่วไปจะเกี่ยวข้องกับการฉีดตัวอย่างไมโครลิตร ปริมาตรที่ใช้โดยทั่วไปจะอยู่ในช่วง 1 ถึง 100 µL ทำให้สามารถวิเคราะห์ตัวอย่างได้หลายตัวอย่างในการวิ่งครั้งเดียว ขนาดเล็กนี้เหมาะสำหรับการทดสอบตามปกติและการควบคุมคุณภาพ

ขนาดคอลัมน์และขนาดอนุภาค

คอลัมน์ที่ใช้ในการวิเคราะห์ HPLC มักจะมีเส้นผ่านศูนย์กลางเล็ก ๆ โดยทั่วไปประมาณ 4.6 มม. และเต็มไปด้วยอนุภาคเฟสคงที่ขนาดเล็ก (3 5 μm) การกำหนดค่านี้ช่วยให้ความละเอียดสูงและการแยกสารประกอบที่มีประสิทธิภาพเหมาะสำหรับการวิเคราะห์โดยละเอียด

วิธีการตรวจจับ

การวิเคราะห์ HPLC ใช้วิธีการตรวจจับที่หลากหลายรวมถึง UV Visible, Fluorescence และ Mass Spectrometry ทางเลือกของเครื่องตรวจจับขึ้นอยู่กับลักษณะของการวิเคราะห์และข้อกำหนดเฉพาะของการวิเคราะห์ เครื่องตรวจจับที่ไม่ทำลายมักใช้เพื่อให้แน่ใจว่าตัวอย่างสามารถวิเคราะห์ได้โดยไม่สูญเสียอย่างมีนัยสำคัญ

ต้องการทราบ 50 คำตอบเกี่ยวกับขวด HPLC โปรดตรวจสอบบทความนี้: 50 คำถามที่พบบ่อยที่สุดเกี่ยวกับขวด HPLC

ทำความเข้าใจ HPLC เตรียมการ

คำจำกัดความและวัตถุประสงค์

ในทางกลับกันการเตรียม HPLC มีจุดมุ่งหมายเพื่อแยกและชำระสารประกอบเฉพาะจากส่วนผสม เป้าหมายหลักคือการแยกปริมาณสารประกอบเป้าหมายให้เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์หรือการใช้งานเพิ่มเติม เกี่ยวกับการเตรียมการ

HPLC มักใช้สำหรับแอปพลิเคชันต่อไปนี้:

การแยกสารประกอบ: การสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ของสารประกอบเฉพาะสำหรับการวิจัยหรือการใช้งานในอุตสาหกรรม

การเตรียมตัวอย่าง: การเตรียมตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์หรือสูตรที่ตามมา

ขนาดของการดำเนินงาน

การเตรียมการ HPLC ดำเนินการในระดับที่ใหญ่กว่า HPLC เชิงวิเคราะห์ ปริมาณตัวอย่างสามารถอยู่ในช่วงตั้งแต่ไม่กี่มิลลิลิตรไปจนถึงหลายลิตรขึ้นอยู่กับผลผลิตที่คาดหวังของสารประกอบเป้าหมาย ขนาดที่ใหญ่ขึ้นนี้ช่วยให้สามารถรวบรวมวัสดุบริสุทธิ์จำนวนมากเพื่อใช้งานต่อไป

ขนาดคอลัมน์และขนาดอนุภาค

คอลัมน์ที่ใช้สำหรับการเตรียม HPLC มีขนาดใหญ่กว่าอย่างมีนัยสำคัญโดยทั่วไปจะมีขนาดตั้งแต่ 20 มม. ถึง 100 มม. หรือใหญ่กว่า คอลัมน์จะเต็มไปด้วยอนุภาคเฟสคงที่ขนาดใหญ่ (โดยทั่วไปคือ 10 20 µm) เพื่อเพิ่มอัตราการไหลและรองรับปริมาณตัวอย่างที่ใหญ่ขึ้น การออกแบบนี้ช่วยลดแรงดันย้อนกลับและบรรลุการแยกสารประกอบที่มีประสิทธิภาพ

วิธีการตรวจจับ