ทุกสิ่งที่คุณจำเป็นต้องรู้เกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่าง HPLC

การเตรียมตัวอย่างเป็นขั้นตอนที่สำคัญในการวิเคราะห์ HPLC ด้วยเหตุผลหลายประการ

ลดการรบกวน:ตัวอย่างมักจะมีสิ่งสกปรกและส่วนประกอบเมทริกซ์ที่สามารถรบกวนการตรวจจับการวิเคราะห์เป้าหมาย เทคนิคการเตรียมตัวอย่างที่มีประสิทธิภาพสามารถช่วยลบสารที่ไม่พึงประสงค์เหล่านี้และปรับปรุงความแม่นยำในการวิเคราะห์

ปรับปรุงการกู้คืน analyte:การเตรียมการที่เหมาะสมช่วยเพิ่มการกู้คืนการวิเคราะห์และทำให้มั่นใจได้ว่าผลลัพธ์สะท้อนให้เห็นถึงความเข้มข้นที่แท้จริงของตัวอย่างดั้งเดิม สิ่งนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับการวิเคราะห์การติดตามที่มีการวิเคราะห์ที่ความเข้มข้นต่ำ

รูปทรงสูงสุดที่เพิ่มขึ้น:ตัวอย่างที่เตรียมไว้อย่างเหมาะสมช่วยสร้างยอดเขาที่สมมาตรและกำหนดไว้อย่างดีในโครมาโตแกรม นี่เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับปริมาณที่แม่นยำ การเตรียมตัวอย่างที่ไม่เหมาะสมอาจส่งผลให้เกิดการปรับระยะและการขยายตัวสูงสุดซึ่งทำให้การตีความข้อมูลมีความซับซ้อน

ปกป้องระบบ HPLC ของคุณ:สารปนเปื้อนในตัวอย่างของคุณสามารถทำลายคอลัมน์และส่วนประกอบอื่น ๆ ในระบบ HPLC ของคุณซึ่งนำไปสู่ค่าใช้จ่ายในการบำรุงรักษาที่เพิ่มขึ้นและการหยุดทำงาน การเตรียมตัวอย่างที่เหมาะสมช่วยลดความเสี่ยงของการอุดตันของระบบและการสึกหรอ

ขั้นตอนแรกในการเตรียมตัวอย่างคือการรวบรวมตัวอย่างของคุณอย่างถูกต้อง ซึ่งรวมถึง:

ใช้ภาชนะที่สะอาด:ใช้ภาชนะที่สะอาดและเฉื่อยเสมอเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน แนะนำให้ใช้ภาชนะพลาสติกแก้วหรือคุณภาพสูง

หลีกเลี่ยงการปนเปื้อน:ใช้ถุงมือและเครื่องมือที่สะอาดเพื่อป้องกันการปนเปื้อนจากความมันและแหล่งอื่น ๆ

การติดฉลากที่เหมาะสม:ฉลากตัวอย่างอย่างชัดเจนเพื่อหลีกเลี่ยงการผสมผสานและตรวจสอบย้อนกลับ

ตัวอย่างการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันทำให้มั่นใจได้ถึงความเป็นเนื้อเดียวกันซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับผลลัพธ์ที่ทำซ้ำได้ เทคนิคการทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน ได้แก่ :

การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันเชิงกล: การผสมตัวอย่างที่เป็นของแข็งหรือกึ่งแข็งโดยใช้เครื่องกวนหรือ homogenizer

การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันอัลตราโซนิก:การประยุกต์ใช้อัลตร้าซาวด์เพื่อกระจายอนุภาคภายในตัวอย่างของเหลว

ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นที่คาดหวังของการวิเคราะห์ตัวอย่างอาจจำเป็นต้องเจือจางหรือเข้มข้น สิ่งนี้สามารถทำได้โดย:

การเจือจาง:เจือจางตัวอย่างไปยังความเข้มข้นที่ต้องการโดยใช้ตัวทำละลายเดียวกับเฟสมือถือ

ความเข้มข้น:การวิเคราะห์สามารถเข้มข้นโดยใช้เทคนิคต่าง ๆ เช่นการระเหยหรือการสกัดเฟสของแข็ง (SPE)

การกรองเป็นสิ่งจำเป็นในการลบสสารอนุภาคที่สามารถอุดตันคอลัมน์ HPLC วิธีการกรองทั่วไป ได้แก่ ：

การกรองเมมเบรน:ใช้ตัวกรอง 0.2µm หรือ 0.45µmเพื่อกำจัดอนุภาค โดยทั่วไปแล้วจะใช้ตัวกรอง polyethersulfone (PES) หรือไนลอน

การกรอง:สำหรับตัวอย่างที่มีปริมาณอนุภาคสูงการกรองผ่านตัวกรองขนาดรูขุมขนขนาดใหญ่สามารถป้องกันการอุดตัน


50 คำถามที่พบบ่อยเกี่ยวกับตัวกรองเข็มฉีดยาตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ตรวจสอบบทความข้อมูลนี้: หัวข้อ "ตัวกรองเข็มฉีดยา" 50 คำถามที่พบบ่อย

พิจารณาความมั่นคงของตัวอย่างของคุณเพื่อป้องกันการเสื่อมสภาพของ analyte

การปรับค่า pH:การปรับค่า pH สามารถช่วยให้การวิเคราะห์บางอย่างมีเสถียรภาพ ตัวอย่างเช่นสารประกอบที่เป็นกรดอาจต้องเป็นกรดเพื่อป้องกันการย่อยสลาย

สารเติมแต่ง:การเพิ่มความคงตัวหรือสารกันบูดสามารถช่วยรักษาความสมบูรณ์ของตัวอย่างในระหว่างการจัดเก็บและการวิเคราะห์

สิ่งสำคัญคือต้องเลือกตัวทำละลายที่ถูกต้องเพื่อละลายตัวอย่างของคุณและตรวจสอบให้แน่ใจว่าเข้ากันได้กับระบบ HPLC ของคุณ พิจารณาสิ่งต่อไปนี้:

ขั้วตัวทำละลาย:เพื่อให้บรรลุการสลายตัวที่สมบูรณ์ตัวทำละลายจะต้องตรงกับขั้วของ analyte

ความเข้ากันได้กับเฟสมือถือ: ใช้ตัวทำละลายที่เข้ากันได้กับเฟสมือถือเพื่อลดการรบกวนที่อาจเกิดขึ้น

7. การเตรียมมาตรฐาน

การเตรียมมาตรฐานการสอบเทียบเป็นสิ่งจำเป็นในการหาปริมาณการวิเคราะห์ในตัวอย่าง ซึ่งรวมถึง:

การเตรียมเส้นโค้งการสอบเทียบ:เตรียมชุดของความเข้มข้นที่รู้จักของ analyte เพื่อสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบสำหรับการหาปริมาณ

ใช้ตัวทำละลายเดียวกัน:เพื่อรักษาความสอดคล้องให้เตรียมมาตรฐานของคุณโดยใช้ตัวทำละลายและเงื่อนไขเช่นเดียวกับตัวอย่างของคุณ

ทำตามขั้นตอนการปฏิบัติงานมาตรฐาน (SOPS):สร้างและปฏิบัติตาม SOPS สำหรับการเตรียมตัวอย่างเพื่อให้แน่ใจว่ามีความสอดคล้องและการทำซ้ำ

ใช้รีเอเจนต์และตัวทำละลายคุณภาพสูง:ใช้ตัวทำละลายเกรด HPLC และรีเอเจนต์ที่มีความบริสุทธิ์สูงเสมอเพื่อลดการปนเปื้อน

รักษาพื้นที่ทำงานของคุณให้สะอาด:รักษาพื้นที่เตรียมตัวอย่างของคุณให้สะอาดและจัดระเบียบเพื่อลดความเสี่ยงของการปนเปื้อน

เอกสารทุกอย่าง:เก็บบันทึกโดยละเอียดของขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างของคุณรวมถึงการเบี่ยงเบนใด ๆ จากโปรโตคอลมาตรฐาน

ตรวจสอบวิธีการ:ตรวจสอบวิธีการเตรียมตัวอย่างเป็นประจำเพื่อให้แน่ใจว่าให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้

รูปร่างที่แย่มาก:หากยอดเขากว้างหรือหางสิ่งนี้อาจบ่งบอกถึงการละลายที่ไม่สมบูรณ์หรือการปรากฏตัวของอนุภาค ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวอย่างของคุณผสมและกรองอย่างละเอียด

Ghost Peaks:ยอดผีอาจเกิดจากสิ่งสกปรกในตัวทำละลายหรือตัวอย่างใช้ตัวทำละลายที่มีความบริสุทธิ์สูงและตรวจสอบให้แน่ใจว่าเครื่องแก้วและอุปกรณ์ทั้งหมดสะอาด

ความไวต่ำ:หากความไวต่ำให้พิจารณาการเพิ่มประสิทธิภาพวิธีการสกัดของคุณหรือเพิ่มความเข้มข้นของการวิเคราะห์ของคุณ

คอลัมน์อุดตัน:การอุดตันบ่อยครั้งอาจบ่งบอกว่าตัวอย่างของคุณมีอนุภาคมากเกินไปหรือไม่ถูกกรองอย่างเพียงพอ ประเมินกระบวนการกรองของคุณอีกครั้งและพิจารณาการกรองล่วงหน้า

ผลลัพธ์ที่ไม่สอดคล้องกัน:การเปลี่ยนแปลงของผลลัพธ์อาจเกิดจากการเตรียมตัวอย่างที่ไม่สอดคล้องกัน สร้างมาตรฐานขั้นตอนทั้งหมดและตรวจสอบให้แน่ใจว่าบุคลากรที่เกี่ยวข้องในการเตรียมตัวอย่างได้รับการฝึกฝนอย่างเหมาะสม

เมื่อความต้องการเชิงวิเคราะห์เพิ่มขึ้นห้องปฏิบัติการจึงใช้เทคนิคการเตรียมตัวอย่างขั้นสูงมากขึ้นเพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพและความแม่นยำ:

SPE เป็นเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายซึ่งช่วยให้การสกัดแบบเลือกของ analytes จากเมทริกซ์ที่ซับซ้อน มันเกี่ยวข้องกับการส่งตัวอย่างของเหลวผ่านวัสดุดูดซับที่เป็นของแข็งที่ยังคงรักษาเป้าหมายการวิเคราะห์ในขณะที่อนุญาตให้สิ่งสกปรกผ่าน

LLE เป็นเทคนิคที่แยกการวิเคราะห์ตามความสามารถในการละลายในของเหลวสองชนิด วิธีนี้มีประสิทธิภาพในการแยกสารประกอบที่มีขั้วที่แตกต่างกันและมักจะใช้ในการวิเคราะห์สิ่งแวดล้อมและเภสัชกรรม

Quechers เป็นวิธีที่ได้รับความนิยมในการเตรียมตัวอย่างอาหารและสิ่งแวดล้อมที่รวมขั้นตอนการสกัดและการทำความสะอาดเข้ากับกระบวนการเดียวทำให้มีประสิทธิภาพและคุ้มค่า

ปริมาณงานและการทำซ้ำสามารถปรับปรุงได้อย่างมีนัยสำคัญโดยระบบการเตรียมตัวอย่างอัตโนมัติซึ่งสามารถทำงานได้เช่นการเจือจางการกรองและ SPE ด้วยการแทรกแซงของมนุษย์น้อยที่สุดซึ่งจะช่วยลดความเสี่ยงของข้อผิดพลาด


ต้องการทราบข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่าง HPLC โปรดตรวจสอบบทความนี้: โซลูชั่นการเตรียมตัวอย่าง HPLC เพื่อผลลัพธ์ที่ดีที่สุด

การเตรียมตัวอย่าง HPLC เป็นขั้นตอนสำคัญที่สามารถส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อความถูกต้องและความน่าเชื่อถือของผลการวิเคราะห์ โดยการปฏิบัติตามแนวทางปฏิบัติที่ดีที่สุดการใช้เทคนิคที่เหมาะสมและการจัดการกับปัญหาที่พบบ่อยห้องปฏิบัติการสามารถเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการเตรียมตัวอย่างโดยใช้เทคนิคและเทคโนโลยีขั้นสูงตามความต้องการเชิงวิเคราะห์วิวัฒนาการ ระบบอัตโนมัติจะปรับปรุงประสิทธิภาพและประสิทธิผลของการวิเคราะห์ HPLC การเตรียมตัวอย่างที่เหมาะสมไม่เพียง แต่ปรับปรุงคุณภาพของผลลัพธ์ แต่ยังปกป้องระบบ HPLC เพื่อให้มั่นใจถึงความน่าเชื่อถือและประสิทธิภาพในระยะยาว