โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) และสเปคตรัมม์โครมาโตกราฟีของเหลว (LCMS) เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่ทรงพลังสองอย่างที่ใช้ในหลากหลายสาขารวมถึงเภสัชกรรมวิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อมและวิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต ในขณะที่ทั้งสองวิธีเกี่ยวข้องกับการแยกและการวิเคราะห์สารประกอบหลักการฟังก์ชั่นและแอปพลิเคชันของพวกเขาแตกต่างกันมาก โพสต์บล็อกนี้จะเปรียบเทียบ HPLC และ LCMS โดยมุ่งเน้นไปที่ความแตกต่างที่สำคัญและข้อดีของแต่ละเทคนิค

หลักการปฏิบัติการ

HPLC

HPLC เป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีที่แยกสารประกอบตามการโต้ตอบกับเฟสที่อยู่กับที่และมือถือ ใน HPLC เฟสเคลื่อนที่ของเหลวจะถูกสูบผ่านคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยเฟสคงที่ซึ่งมักจะประกอบด้วยอนุภาคขนาดเล็กของซิลิกาหรือโพลีเมอร์ เมื่อมีการนำตัวอย่างผสมเข้าสู่ระบบส่วนประกอบจะถูกแยกออกจากความสัมพันธ์ของพวกเขาสำหรับเฟสคงที่ สารประกอบที่มีปฏิสัมพันธ์อย่างมากกับเฟสคงที่จะช้าลงช้ากว่าในขณะที่สารประกอบที่มีปฏิสัมพันธ์น้อยลงอย่างรุนแรงยิ่งขึ้นเร็วขึ้น จากนั้นสารประกอบที่แยกจากกันจะถูกตรวจพบโดยใช้เครื่องตรวจจับที่หลากหลายเช่น UV VIS, Fluorescence หรือ Index Index Detectors

ต้องการทราบข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับแอปพลิเคชันของขวดโครมาโตกราฟีโปรดตรวจสอบบทความนี้:15 แอปพลิเคชันของขวดโครมาโตกราฟีในสาขาต่าง ๆ

LCMS

LCMS รวมความสามารถในการแยกของ HPLC เข้ากับความสามารถในการวิเคราะห์มวลของสเปคโตรเมตรีมวล ใน LCMS ตัวอย่างจะถูกแยกออกเป็นครั้งแรกโดยใช้ HPLC เช่นเดียวกับใน HPLC ทั่วไป อย่างไรก็ตามแทนที่จะถูกตรวจพบโดยเครื่องตรวจจับทั่วไปสารประกอบที่ถูกนำไปใช้จะถูกนำไปใช้ในสเปกโตรมิเตอร์มวล สเปคโตรมิเตอร์มวลทำให้สารประกอบและวัดอัตราส่วนมวลต่อการชาร์จของพวกเขาให้ข้อมูลโดยละเอียดเกี่ยวกับน้ำหนักโมเลกุลและโครงสร้างของการวิเคราะห์ การรวมกันของการแยกและสเปกโตรเมตรีมวลนี้ให้ความไวและความจำเพาะมากกว่า HPLC เพียงอย่างเดียว

กลไกการแยก

HPLC:HPLC ใช้แรงดันสูงในการผลักเฟสเคลื่อนที่ของเหลวผ่านคอลัมน์ที่บรรจุอยู่ในเฟสคงที่ สารประกอบจะถูกแยกออกจากการโต้ตอบที่แตกต่างกับเฟสคงที่ทำให้เกิดการแยกที่แม่นยำและมีประสิทธิภาพ

LCMS:LCMS รวมความสามารถในการแยกทางกายภาพของ HPLC เข้ากับความสามารถในการใช้สเปกโตรเมตรีมวลของมวลสารสเปกโตรเมตรี (MS) ส่วนประกอบโครมาโตกราฟีของเหลวแยกสารประกอบในขณะที่สเปกโตรมิเตอร์มวลวัดอัตราส่วนมวลต่อประจุของสปีชีส์ที่แตกเป็นไอออน

ความไวและการเลือก

HPLC:HPLC มีความไวและการเลือกที่ดีโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อรวมกับเครื่องตรวจจับขั้นสูงเช่น UV VIS, Fluorescence หรือเครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอด อย่างไรก็ตาม HPLC เพียงอย่างเดียวอาจไม่ได้ให้ความจำเพาะที่เพียงพอสำหรับตัวอย่างที่ซับซ้อน

LCMS:LCMS มีความไวและการเลือกที่เหนือกว่าเมื่อเทียบกับ HPLC แมสสเปกโตรมิเตอร์สามารถระบุและหาปริมาณสารประกอบได้อย่างแม่นยำตามอัตราส่วนมวลต่อการชาร์จที่ไม่ซ้ำกันแม้ในเมทริกซ์ที่ซับซ้อน สิ่งนี้ทำให้ LCMS มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการวิเคราะห์สารประกอบการติดตามและยืนยันตัวตนของสารที่ไม่รู้จัก

การเตรียมตัวอย่าง

HPLC:การเตรียมตัวอย่างสำหรับ HPLC มักจะเกี่ยวข้องกับการเจือจางการกรองหรือเทคนิคการสกัดอย่างง่าย ตัวอย่างไม่จำเป็นต้องระเหยดังนั้น HPLC จึงเหมาะสำหรับสารประกอบที่หลากหลายรวมถึงสารขั้วและไม่ระเหย

LCMS:การเตรียมตัวอย่างสำหรับ LCMS นั้นคล้ายคลึงกับ HPLC แต่อาจจำเป็นต้องใช้ขั้นตอนเพิ่มเติมเพื่อให้แน่ใจว่าเข้ากันได้กับเครื่องสเปกโตรมิเตอร์มวล ตัวอย่างเช่นอาจจำเป็นต้องมีบัฟเฟอร์หรือสารเติมแต่งที่ระเหยได้เพื่อปรับปรุงการไอออนไนซ์และป้องกันการปราบปรามไอออน

แอปพลิเคชัน

HPLC:HPLC ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการวิเคราะห์ยาอาหารและตัวอย่างสิ่งแวดล้อม มันมีประสิทธิภาพโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกและการหาปริมาณสารประกอบในส่วนผสมที่ซับซ้อนเช่นสิ่งสกปรกของยาเสพติดสารเติมแต่งอาหารและสารกำจัดศัตรูพืชตกค้าง

LCMS:LCMS มีแอพพลิเคชั่นที่หลากหลายรวมถึง:

การวิเคราะห์ทางเภสัชกรรม: ใช้ในการค้นพบยาการพัฒนาและการควบคุมคุณภาพ

โปรตีโอมิกส์และเมแทบอลิซึม: ใช้ในการระบุและหาปริมาณโปรตีนและเมตาโบไลต์ในตัวอย่างทางชีวภาพ

การวิเคราะห์สิ่งแวดล้อม: ใช้ในการตรวจจับการปนเปื้อนในน้ำดินและอากาศ

อยากรู้เกี่ยวกับบทบาทของขวด HPLC ที่ผ่านการรับรองในการรับรองการวิเคราะห์ตัวอย่างที่แม่นยำ? อ่านบทความนี้: ความสำคัญของขวด HPLC ที่ผ่านการรับรองสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างที่ถูกต้อง

บทสรุป

HPLC และ LCMS เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่ทรงพลังด้วยจุดแข็งและข้อ จำกัด ของตนเอง ตัวเลือกระหว่างทั้งสองขึ้นอยู่กับข้อกำหนดเฉพาะของการวิเคราะห์เช่นความไวการเลือกความซับซ้อนของตัวอย่างและทรัพยากรที่มีอยู่

HPLC เป็นตัวเลือกที่ดีสำหรับการวิเคราะห์ตามปกติของสารประกอบที่รู้จักในเมทริกซ์ที่ค่อนข้างง่ายซึ่งต้นทุนและความสะดวกในการใช้งานเป็นปัจจัยสำคัญ ในทางกลับกัน LCMS เป็นเทคนิคที่ต้องการสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างที่ซับซ้อนระบุสารประกอบที่ไม่รู้จักและบรรลุการตรวจจับระดับพิเศษ

ในขณะที่เทคโนโลยียังคงดำเนินต่อไปการบูรณาการ HPLC และ LCMS จะมีบทบาทสำคัญมากขึ้นในการตอบสนองความต้องการการพัฒนาของเคมีวิเคราะห์และสร้างความมั่นใจว่าผลลัพธ์ที่มีคุณภาพสูงในการใช้งานต่างๆ

คู่มือที่ดีที่สุดสำหรับตัวกรองเข็มฉีดยา 0.45 ไมครอนสำหรับคุณ

ต่อไป:

ทุกสิ่งที่คุณจำเป็นต้องรู้เกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่าง Headspace GC