Қазіргі заманғы аналитикалық зертханада хроматография әдеттегі хаттамадан әлдеқайда көп; бұл молекулалық әсерлесудің күрделі биі. Сіз фармацевтикалық қоспалардың мөлшерін анықтайсыз ба немесе із деңгейінде қоршаған ортаны ластаушы заттарды анықтайсыз ба, бөлудің негізгі физикасын түсіну техникті шебер хроматографтан ерекшелендіреді.
Зертханадағы табыс тек жоғары деңгейлі аспап параметрлерінен ғана емес. Ол сіздің әдіс химияңыз бен үлгі тұтастығын қорғайтын жоғары сапалы шығын материалдары арасындағы синергияда өмір сүреді. Күрделілерді шарлау үшін
HPLC және LC-MS: қайсысын таңдау керек
, немесе тұрақсыз бастапқы көрсеткіштермен күресу үшін бұл нұсқаулық әлемдік деңгейдегі деректерге қол жеткізу және құралдың жұмыс уақытын барынша арттыру үшін стендтік құпиялармен бөліседі.
Гидрофобты қол алысуды түсіну: кері фазалық хроматография дегеніміз не?
Негізгі сұраққа жауап беру үшін - кері фазалық хроматография дегеніміз - оқулықтағы анықтамадан тыс қарау керек. Оның негізінде бұл «судан қорқу» (гидрофобтылық) негізіндегі бөлу. Кері фазалық жоғары қысымды сұйық хроматографияда (RP-HPLC) біз молекулаларды гидрофобты сипаты бойынша сұрыптау үшін полярлы емес стационарлық фазаны және полярлық жылжымалы фазаны қолданамыз.
C18 (октадецил) тізбегінің химиясы
Ең көп тараған стационарлық фазаға C18 (октадецил) тізбектерімен байланысқан кремний негізіндегі бөлшектер жатады. Менің тәжірибемнен осы C18 тізбектерінің тығыздығы және кремний диоксиді тіреуінің сапасы әдісіңіздің беріктігін анықтайды. Көптеген аналитиктер негізгі қосылыстарды талдау кезінде ең жоғары қалдықпен кездеседі. Бұл көбінесе кремний диоксиді бетіндегі қалдық силанол топтарының қажетсіз ион алмасу орындары ретінде әрекет етуінен туындайды.
Мұны шешу үшін біз ұштары жабылған бағанды қолданамыз, онда кішірек силандар осы белсенді сайттарды «маскалайды». Дегенмен, тіпті ең жақсы бағана нашар инъекцияны түзете алмайды. Егер хроматографиялық шыңыңыз бағанға тигенге дейін бұрмаланған болып көрінсе, құтыны тексеріңіз. Жоғары тазалықты пайдалану
Әмбебап фигурасы бар 9 мм қысқа жіпті құтылар
ине оны алғанға дейін талданатын заттың құты қабырғаларына адсорбцияланбауын қамтамасыз етеді.
HPLC әдісін әзірлеудегі органикалық модификатор өнері
Талдаушы заттарыңызды сақтау уақыты органикалық модификатор HPLC концентрациясымен реттеледі. Ацетонитрил немесе метанолдың сулы буферге қатынасын реттеу арқылы жылжымалы фазаның «элюция күшін» реттейсіз.
Әдістерді тасымалдау кезінде мен көретін жалпы қателік - түсінілмеген градиент элюциясы қисығы. Органикалық модификаторды тым жылдам арттырсаңыз, ажыратымдылықты жоғалтасыз; тым баяу, және сіз ең жоғары кеңеюден және еріткіштің ысырап болуынан зардап шегесіз. Арасында ауысқанда
Аналитикалық және дайындық HPLC
, градиент көлбеуін басқару масштабты сәтті үлкейтудің негізгі факторына айналады. Есіңізде болсын, ацетонитрил төмен тұтқырлық пен жоғары элюция күшін ұсынады, ал метанол ACN жіберіп алуы мүмкін полярлық қосылыстар үшін әртүрлі селективтілікті қамтамасыз ете алады.
GC Элюция тәртібін дешифрлеу: қосылыстардың бөлінуін болжау
Gc сұйылту тәртібін болжау газ хроматографы үшін ең пайдалы тапсырмалардың бірі болып табылады. Еріткіш химиясы негізгі тұтқа болып табылатын HPLC-ден айырмашылығы, GC бөлу «Үштік бөлу» арқылы белгіленеді: қайнау температурасы, молекулалық полярлық және баған температурасын бағдарламалау.
Термодинамика және дипольдық өзара әрекеттесу
Полярлы емес стационар фазада gc элюция тәртібі қайнау температурасына қатаң сәйкес келеді. Неғұрлым ұшпа қосылыстар бірінші болып шығады. Дегенмен, PEG\/Wax сияқты полярлық бағанды пайдаланған кезде ойын өзгереді. Мен жақында қайнау нүктелері бірдей болатын изомерлерді қамтитын жобаны өңдедім. Полярлық фазаға ауысу арқылы диполь-дипольді өзара әрекеттесу бізге бұл қосылыстарды олардың өлшеміне емес, электрондық құрылымына қарай бөлуге мүмкіндік берді.
Қоршаған орта іздерін талдау сияқты жоғары сезімталдықты жұмыс үшін үлгі контейнерінің тұтастығы маңызды болып табылады. Қолдану
20 мм қысқыш үстіңгі бас кеңістігіне арналған флакондар
ұшпа аналиттердің жоғалуын болдырмайды, бұл сіздің массалық спектрлік деконволюцияңыз ағып кеткен фракцияға емес, үлгіңіздің шынайы көрінісіне негізделгенін қамтамасыз етеді.
HPLC және LC-MS: сезімталдықты ауыстыруды шарлау
Біздің зертханада жиі қойылатын сұрақ: «HPLC және LC-MS-тен қашан көшуіміз керек?» Жауап қажетті сезімталдықта жатыр. УК анықтауы бар HPLC микрограмм деңгейлерінде әдеттегі QC үшін тамаша болғанымен, LC-MS пикограмма деңгейлерін анықтау немесе күрделі матрицаларда белгісіздерді анықтау қажет болғанда қажет.
Егер сіз LC-MS жүйесіне көшетін болсаңыз, флакон таңдауыңыз одан да маңызды болады. Стандартты қақпақтар пластификаторларды мобильді фазаға сілтілей алады, бұл сіздің хроматограммаңызды қудалайтын «Елес шыңдарды» жасайды. Сол себепті Айжирендікі
Бекітілген бұрандалы қақпақтар
MS-сертификатталған зертханалардағы негізгі өнім болып табылады — олар септалардың құтыға түсу немесе ластаушы заттардың детекторға шайылуы қаупін жояды.
Керемет хроматографиялық шыңның анатомиясы
Әрбір хроматографиялық шың диагностикалық құрал болып табылады. Өткір, симметриялы Гаусс шыңы жүйеңіздің оңтайландырылғанын көрсетеді. «Иық» немесе «құйрық» бірдеңе дұрыс емес екенін айтады, көбінесе аппараттық құралға немесе өлі көлемге қатысты.
Өлі көлемді және бағаннан тыс көлемді жою
Ажыратымдылықты үнсіз өлтірушілердің бірі - өлі көлем. Ине мен құты түбінің арасында бос орын болса, үлгі таралады. Микро сынама алу үшін мен әрқашан конустық кірістірулерді пайдалануды ұсынамын. Бұл кірістірулер үлгіні тар, тік жолға мәжбүрлеп, «өткір тығын» инъекциясын қамтамасыз етеді. Бұл, әсіресе дисперсия жау болып табылатын жоғары қысымды жүйелерде, ең жоғары шыңға және сигнал-шуыл арақатынасына тікелей әкеледі.
Профессионал сияқты ақауларды жою: негізгі шуылдан Septa Coring-ге дейін
Ақаулықтарды жою жылдарында мен құрал ақауларының 70% шын мәнінде тұтынылатын мәселелер екенін анықтадым.
-
Базалық шу және елес шыңдары: егер сіз болмауы керек шыңдарды көрсеңіз, сүзгілеріңіз кінәлі болуы мүмкін. Әрқашан сілтеме жасаңыз
0,22 микрон сүзгілеріне арналған толық нұсқаулық
шприц сүзгілерін таңдамас бұрын.
-
Septa Coring: Егер сіз құтыда силикон бөліктерін көрсеңіз, сіздің ине септаларды «кеп жатыр». Бұл сапасыз қақпақтармен болады. Біздің ND11 қысқыш қақпақтарымыз және 10-425 бұрандалы қақпақтарымыз фрагментациясыз бірнеше тесуге төтеп беру үшін дәлдікпен жасалған.
-
Сақтаудағы тұрақтылық: EPA әдістері немесе ұзақ мерзімді сақтау үшін пайдалану
24-400 EPA құты
боросиликатты шыныдан жасалған еріткіштің нөлдік жоғалуын және нөлдік ластануды қамтамасыз етеді.
Неліктен деректер тұтастығы тұтынылатын материалдан басталады
Біз жиі жоғары деңгейлі жүйеге 50 000 АҚШ долларын жұмсаймыз, содан кейін құтыға тиындарды үнемдеуге тырысамыз. Менің тәжірибемде суб-параметрлі флакон сіздің зертханаңыздағы ең қымбат нәрсе болып табылады, себебі ол «қайта жұмыс істеуге» және «сәтсіз тексерулерге» әкеледі.
Қарапайым хроматография үшін 1 мл қабық флакондары немесе автоматтандырылған GC үшін 18 мм бұрандалы жіпті бас кеңістігі флакондары қажет пе, Aijiren мамандар талап ететін консистенцияны қамтамасыз етеді. Біз сіздің gc элюция тәртібі күн сайын қайталанатынына және хроматографиялық шыңыңыз әдісті жасаған күніңіздегідей өткір болуына кепілдік береміз.
Сарапшыларға қолдау көрсету және сұраулар: Сіз сәйкес келмейтін нәтижелерге тап болдыңыз ба немесе әдісті әзірлеумен күресіп жатырсыз ба? Жұмыс процесін бірге оңтайландырайық. Техникалық кеңес алу үшін маған хабарласыңыз:
Қорытынды Кері фаза дегенді меңгеру және аспаптың қыр-сырын меңгеру – үздіксіз оқу саяхаты. HPLC органикалық модификаторын және ең жақсы шығын материалдарын таңдау арқылы сіз деректеріңіздің шындығына инвестиция жасайсыз. Параметрі төмен құты апталап әзірлеуге жұмсалған тамаша әдісті бұзуына жол бермеңіз.
Ағылшын
қытай
